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產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
DH10Bac
詳情介紹：
感受態(tài)細(xì)胞基本信息
| 出品公司: | Invitrogen |
|---|---|
| 感受態(tài)細(xì)胞名稱: | DH10Bac |
| 菌株類型: | E.coli |
| 產(chǎn)品目錄號(hào): | 10361-012 |
| 培養(yǎng)基: | LB培養(yǎng)基 |
| 生長(zhǎng)條件: | 37 ℃, 有氧 |
| 基因型: |
 |
| 抗性: | 卡那，四環(huán)素 |
| 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化條件: | 42 ℃熱激 |
| 應(yīng)用: | 重組桿粒生產(chǎn)菌株 |
| 誘導(dǎo)方法: | -- |
| 菌株特點(diǎn): |
DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞是用來(lái)生產(chǎn)用于真核細(xì)胞蛋白表達(dá)的重組桿狀病毒分子。 高效DH10Bac細(xì)胞含有父Bacmid的bMON14272和輔助質(zhì)粒pMON7124。父Bacmid的包含一個(gè)小型F復(fù)制子，卡鈉霉素抗性基因，attTn7重組位點(diǎn)和lacZα互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含的tnsABCD的區(qū)域,提供了轉(zhuǎn)座蛋白，這些轉(zhuǎn)座蛋白可以 供體質(zhì)粒(Donor plasmid)上的小Tn7位點(diǎn)插入到父本Bacmid的重組目的位點(diǎn)。輔助質(zhì)粒pMON7124包含有四環(huán)素抗性(Tetracycline). DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞本身含有卡那霉素和四環(huán)素抗性。在制作感受態(tài)細(xì)胞的時(shí)候，需要加入這兩種抗生素，以防止DH10Bac中的質(zhì)粒父本桿粒bMON14272（卡那霉素抗性）和輔助質(zhì)粒pMON7124（四環(huán)素抗性）在細(xì)胞擴(kuò)增過(guò)程中丟失，提高質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后的基因轉(zhuǎn)座效率。 攜帶Tn7轉(zhuǎn)座元件的 供體質(zhì)粒pFastBac，含有慶大霉素抗性基因，桿狀病毒多角體啟動(dòng)子，一個(gè)多克隆位點(diǎn)區(qū)域和SV40的poolyadenylation信號(hào)。 重組的Bacmid分子通過(guò)將多克隆位點(diǎn)包含有基因編碼序列的 供體質(zhì)粒pFastBa質(zhì)粒DH10Ba感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化與在編碼序列克隆到多個(gè)克隆網(wǎng)站（重組成功的質(zhì)粒在選擇性培養(yǎng)基平板上呈現(xiàn)為白色菌落）。然后可以將重組Bacmid進(jìn)行挑菌，小量提取分離并且轉(zhuǎn)染到昆蟲(chóng)細(xì)胞，從而進(jìn)行感染重組桿狀病毒顆粒生產(chǎn)。 高效DH10Ba感受態(tài)細(xì)胞的能夠有效抵抗連接酶和連接酶緩沖液，同時(shí)可以容忍少量未稀釋的連接反應(yīng)。 φ80dlacZDM15標(biāo)記可以利用Bacmid載體中的β-半乳糖苷酶基因α-互補(bǔ)使用含X-gal平板培養(yǎng)基的藍(lán)白斑菌落篩選。 綜上所述，DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞本身含有卡那霉素和四環(huán)素抗性，而供體質(zhì)粒pFastbac含有慶大霉素的抗性，所以在制備DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞時(shí)需要在培養(yǎng)時(shí)添加卡那霉素和四環(huán)素，而在制備桿粒時(shí)需要使用卡那霉素，四環(huán)素，慶大霉素的三抗平板。 |